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生物化学与分子生物学实验指导（第二版）
作者：
 费正 主编
定价：
78 元
页数：
253页
ISBN：
978-7-309-16246-2/Q.114
字数：
257千字
开本：
16 开
装帧：
平装
出版日期：
2023年10月 　　　　　　
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内容提要

      
       前言
      
       生物化学是一门迅速发展的学科，新理论、新发现层出不穷。而这些都必须依赖于科学实验和资料的积累，才能探知生命的奥秘、构成生命的物质基础和生物体内复杂的化学变化规律。作为现代生命科学的基础学科，生物化学和分子生物学有助于从细胞水平、分子水平和蛋白质水平探讨病因，为疾病的防治和增进健康作出贡献，推动医学水平的不断向前发展。原书编写于2012年，随着时间的变迁，书中的许多实验内容和技术有了大幅度的提高和创新。此次修订的第二版旨在除让学生学习经典的基础生物化学、分子生物学和细胞生物学实验外，也能学到近年来新颖的实用理论、技术与技能。在实验篇中除了原有分光光度计检测方案外，还增加了灵敏度更高、试剂用量更少的微量样本酶标仪检测方案，以供不同实验教学条件的院校使用。
       本书分为理论篇、实验篇和附录3个板块。实验篇包含了基础实验、综合性实验和设计性实验；附录中有实验报告须知、常用生物化学仪器和常用试剂配制等。生物化学实验的目的在于让学生掌握实验的基本原理、基本操作和基本技能，并对实验的不同部分给以不同的要求，以便学生能够真正地了解、熟悉、掌握。培养学生独立分析问题和解决问题的能力，树立严谨、求实的科学态度。学生通过生物化学与分子生物学实验将课堂的理论和实验操作联系起来，从而起到理论联系实际的作用。
       为提高学生的动手能力和自主设计能力，在实验教材中增订了一些新的综合性实验和设计性实验。通过类似于科研方法的学习，将多个基础实验融入一个完整项目中，让学生学会科研的基本方法和思路；为了培养学生自主学习和动手能力，给出一些新颖实用的实验课题，作为实验设计项目。让学生自己查阅文献、设计实验，最后完成实验，从而培养学生实验设计、综合运用、宏观思维和辩证分析问题的基本技术素质和工作技能。
       免疫学实验为本次增补内容。主要有单克隆和多克隆抗体的制备、免疫印迹术（Western blot，WB）、酶联免疫吸附、免疫组化和免疫荧光、免疫电泳、生物质谱以及飞行时间质谱等实验与理论。
       细胞培养已是现代生物化学实验技术不可或缺的组成部分。在原先的基础上又增加了以下内容： 常用细胞实验研究方法；基因沉默、基因敲除和基因敲减技术等；反义RNA及RNAi技术；基于RNA、DNA水平的基因过表达等；同时也增加了荧光显微镜和流式细胞仪的使用，以及相关细胞株、细胞库和网站的介绍。
       为了培训学生综合运用各项实验技能的目的，本书的综合性实验项目强调多项实验技术的整合及系统应用，如综合性实验项中有这样一个实验： 利用WB原理，检测某细胞蛋白。主要用于观察细胞中某个目标蛋白的表达含量或化学修饰的变化。为了让本科生掌握这门技术，从细胞培养开始，先熟悉细胞培养的环境条件及操作要领。获得细胞后，用裂解液破碎细胞提取胞质蛋白，然后对蛋白定量。定量后将蛋白质用电泳分离和转印后，用抗体进行分子杂交，最后显影。整个实验过程按照科研要求进行。完成这一系列实验，学生既可以丰富相关的实验理论，如细胞培养及无菌操作、蛋白含量测定、电泳、分子杂交理论等，又可在实验中学会基础实验方法，同时熟悉众多相关仪器设备的使用，如细胞培养箱、超净工作台、倒置相差显微镜、低速离心机、台式高速离心机、酶标仪、电泳仪、垂直电泳槽和转印电泳槽、凝胶成像系统、微量移液器的使用，熟悉生物化学与分子生物学实验常用的实验耗材等。这些实验内容分布于4个小实验中，最终构成一个完整的综合性实验项目。
       再如为了让学生熟悉基因工程的上游操作，在综合性分子生物学实验中先讲解整个分子生物学的内容及相关理论，然后让学生对选定的载体DNA和目标基因DNA进行酶切鉴定，对前面实验中得到的载体DNA大片段及目标基因DNA小片段进行回收和纯化，然后将目标基因DNA连接到选定载体DNA中，完成DNA重组。重组的DNA转化入大肠埃希菌，经抗生素筛选转化成功的菌落。将转化成功的菌落扩增，然后提取重组DNA质粒，用聚合酶链反应和酶切鉴定的方式，筛选出正确重组的质粒DNA。这一系列学习，可涵盖基因工程的上游实验内容。
       在设计性实验，利用生物化学和分子生物学原理，设计一个已知基因图谱但属于未知新病毒的快速检测或诊断试剂盒，让学生通过已学过的生物化学和分子生物学理论，通过查阅文献利用多种方法来设计快速诊断与检测试剂盒，不但可以巩固已学过的理论和实验知识，还可进一步了解科学实验研究的基本方法与思路。
       人类基因组计划的启动和进展，更显示出生物化学和分子生物学实验技术是生命科学研究领域和临床诊疗应用领域中一项非常重要的基本技术。此次修订中，分子生物学也是重点介绍和修正的内容。除了一些基础分子生物学实验内容外，还介绍了近年较为流行的基因敲除动物模型的建立、核酸类治疗方法，如嵌合抗原受体T细胞免疫疗法、基因治疗和病毒治疗等的前沿研究成果，让学生尽可能了解分子生物学实验方法与技术前沿。
       现代生物化学与分子生物学实验已经不是单纯的生物化学实验，还融入了免疫学、细胞培养和分子生物学实验。这些实验方法离不开先进的实验仪器设备，本书的附录部分对此作了详细介绍。希望通过本次的大规模修订，能给各位老师与同学带来焕然一新的感受。编写过程中不免存在许多不妥之处，祈望不吝指教。
      
       费正
       2023年9月
      

作者简介

书摘

       目录
      
       第一篇 理论篇
      
       第一章 生物化学与分子生物学实验室准备知识与实验室安全
       第一节 学生实验须知
       第二节 实验室安全及防护知识
       第三节 实验记录与实验报告
       第四节 实验室基本操作
      
       第二章 生物大分子的制备
       第一节 动物组织或细胞蛋白质的提取、纯化与定量
       第二节 抗体的制备与纯化
       第三节 动物组织或细胞内核酸的提取、纯化与定量
       第四节 样本的浓缩、干燥和保存
      
       第三章 蛋白质实验技术
       第一节 电泳
       第二节 分子杂交
       第三节 生物质谱
       第四节 色谱在生物大分子分离纯化中的应用
      
       第四章 细胞培养
       第一节 细胞培养基本知识
       第二节 细胞培养基本技术
       第三节 细胞培养及功能常用研究方法
      
       第五章 分子生物学技术
       第一节 分子生物学技术概论
       第二节 聚合酶链反应
       第三节 外源基因与载体的连接
       第四节 重组DNA的筛选鉴定
       第五节 重组DNA的表达
       第六节 表达产物的分离纯化
       第七节 基因敲除、敲入和过表达小鼠模型的建立
       第八节 生物药物前沿研究
      
       第二篇 实验篇
      
       第六章 基础性实验
       实验一 蛋白质定性实验
       实验二 改良Lowry比色法（Hartree法）定量蛋白质
       实验三 紫外分光光度法定量蛋白质
       实验四 二喹啉甲酸法定量蛋白质
       实验五 考马斯亮蓝法定量蛋白质
       实验六 肝脏丙氨酸氨基转移酶活性测定
       实验七 血清葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法——葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法
       实验八 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
       实验九 血清总胆固醇测定
       实验十 血清高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇测定
       实验十一 醋酸纤维薄膜电泳
       实验十二 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳
       实验十三 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
       实验十四 等电聚焦电泳
       实验十五 免疫电泳
       实验十六 Western印迹术
       实验十七 细胞复苏、传代及冻存
       实验十八 药物对细胞增殖活性的影响——MTT、 CCK-8法
       实验十九 重组质粒的构建与鉴定
       实验二十 基因敲除小鼠的鉴定
      
       第七章 综合性实验
       实验一 乳汁过氧化物酶的提取纯化与活性鉴定
       实验二 靶向结肠癌细胞表面抗原EpCAM1的CAR-T细胞的构建
       实验三 活性氧对细胞形态、分泌及凋亡的影响
      
       第八章 设计性实验
       实验一 血浆高密度脂蛋白、低密度脂蛋白的分离及鉴定
       实验二 乳酸脱氢酶同工酶的测定与急性心肌梗死的临床鉴定
       实验三 免疫组织化学方法考察小分子抑制剂对小鼠肿瘤微环境组成的影响
       实验四 糖尿病的发病机制、分型与检测
       实验五 核酸检测SARS-CoV-2试剂盒
       附：设计性实验概论
      
       附录
       附录一 常用仪器使用
       附录二 常用缓冲液配制及单位换算
      
       参考文献
      

书评       
　  

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